국립중앙과학관 세종과학실험 토론캠프​​

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전기영동 기법을 활용한 사람 가계도 분석

1. 실험목표

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​DNA 조각을 나타내는 염료분자를 크기별로 분리하는 아가로스 전기영동에 대해 학습한다. 어떻게 이 조각들이 각자의 독특한 DNA 패턴을 형성하는지 학습한다. 이 패턴을 토대로 부모를 감별한다.

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2. 실험재료

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​1X TAE buffer, 증류수, Agarose gel powder, gel red, 내 아버지는 누구? 실험 키트

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3. 실험기구

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​gel tray, Hot plate, 전자저울, 약수저, 삼각 플라스크, 거름종이, micro pipet, 팁, PCR tube, PCR tube rack, 폴리글러브

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4. 실험방법 실험1> Agarose gel의 제작(1% gel)

1) 100ml의 1X TAE(또는 TBE 또는 SB) buffer를 삼각 플라스크에 준비한다.

* 50X TAE stock solution 제조: Tris base 242g, Glacial acetic acid 57.1ml, 0.5M ETDA 100ml 용액에 증류수를 첨가하여 최종 1L 를 만든다.(1X로 희석하여 사용)

2) 1g의 agarose powder를 넣은 후 전자레인지에서 완전히 용해될 때까지 끓여준다.

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사진1. TAE buffer 용액에 agarose powder을 넣고 가열하는 모습

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3) 50∼60℃까지 식힌 후, (pre-staining의 경우 Staining STAR, EtBr 등의 staining dye를 mix한 후) gel tray에 용액을 기포가 생 기지 않도록 천천히 붓고 comb을 꽂은 후 굳힌다.

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사진2. gel tray에 용액을 굳히는 모습

4) Gel이 굳으면(약 30~40분 후) comb을 제거한 후 전기영동조로 옮긴다.

실험2> 내 아버지는 누구?

1) Gel의 well에 sample 용액을 loading한다.

가. 샘플 용량 확인 : 때로는 적은 양의 샘플이 튜브 벽면에 붙게 된다. 샘플 전체가 겔을 로딩하기 전에 튜브 끝에 위치해야 한다.

2) A ~ E 튜브에 있는 염료 샘플을 각각 순서대로 겔 홈에 로딩힌다. 이 때 로딩할 양은 35~38 ul 정도면 된다.

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A튜브 : Marker DNA

B튜브 : 어머니 1

C튜브 : 어머니 2

D튜브 : 소년 1

E튜브 : 소년 2

F튜브 : 아버지 1

3) 전기영동 장치를 작동시키고 10분 후 염료가 분리되는 모습을 관찰한다.

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사진 3. 전기영동 후 샘플 모습

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